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大鼠內臟脂肪組織提取物【培養指南】對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法

發表時間:2024-04-10 13:56

大鼠內(nei)臟脂肪組織提(ti)取物【培養指(zhi)南】對于貼(tie)壁細胞,傳代(dai)可參考(kao)以下方(fang)法:

1. 棄去培養(yang)上清,用(yong)不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加2ml消(xiao)化(hua)(hua)液(ye)(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培(pei)養(yang)瓶中,置于37℃培(pei)養(yang)箱中消(xiao)化(hua)(hua)1-2分(fen)(fen)鐘,然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞(bao)|細胞(bao)消(xiao)化(hua)(hua)情況,若(ruo)細胞(bao)大(da)部(bu)分(fen)(fen)變(bian)圓(yuan)并脫落,迅速拿回(hui)操作(zuo)臺,輕敲幾(ji)下培(pei)養(yang)瓶后加少量培(pei)養(yang)基終止消(xiao)化(hua)(hua)。

3. 按6-8ml/瓶補加培(pei)養(yang)基,輕(qing)輕(qing)打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培(pei)養(yang)液后吹勻。

4. 將細胞懸液(ye)按1:2到1:5的(de)比例分到新(xin)的(de)含(han)8ml培(pei)養基的(de)新(xin)皿中或者(zhe)瓶中。

對于懸(xuan)浮細(xi)胞,傳代可參考以下方法:

方法一:收集細(xi)胞(bao),1000RPM條件(jian)下離心4分鐘(zhong),棄去上清液,補加(jia)1-2mL培養液后吹(chui)勻,將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿(min)中或者瓶(ping)中。

方法二:可選擇半數(shu)換液方式,棄去半數(shu)培養基(ji)后,將剩(sheng)余細胞懸(xuan)起(qi),將細胞懸(xuan)液按1:2到1:3的(de)比例分到新(xin)的(de)含8ml培養基(ji)的(de)新(xin)皿(min)中(zhong)或(huo)者(zhe)瓶(ping)中(zhong)。

【細胞凍存】

待細(xi)(xi)胞(bao)生(sheng)長狀(zhuang)態良(liang)好時(shi),可(ke)進行(xing)(xing)293/HEK-293細(xi)(xi)胞(bao)|細(xi)(xi)胞(bao)凍(dong)(dong)存(cun)(cun)(cun)。貼壁細(xi)(xi)胞(bao)凍(dong)(dong)存(cun)(cun)(cun)時(shi),棄去培養基后加(jia)(jia)(jia)(jia)(jia)入(ru)少(shao)量胰酶,細(xi)(xi)胞(bao)變圓脫落后,加(jia)(jia)(jia)(jia)(jia)入(ru)約1ml含血清(qing)的培養基后加(jia)(jia)(jia)(jia)(jia)入(ru)凍(dong)(dong)存(cun)(cun)(cun)管中,再添加(jia)(jia)(jia)(jia)(jia)10%DMSO后進行(xing)(xing)凍(dong)(dong)存(cun)(cun)(cun)。懸浮細(xi)(xi)胞(bao)凍(dong)(dong)存(cun)(cun)(cun)時(shi),應將細(xi)(xi)胞(bao)收(shou)集,1000RPM條件下離心4分鐘,少(shao)量保存(cun)(cun)(cun)上(shang)清(qing)液(防止細(xi)(xi)胞(bao)吸走),加(jia)(jia)(jia)(jia)(jia)入(ru)部分新鮮培養基,加(jia)(jia)(jia)(jia)(jia)入(ru)到凍(dong)(dong)存(cun)(cun)(cun)管中,在凍(dong)(dong)存(cun)(cun)(cun)管中加(jia)(jia)(jia)(jia)(jia)入(ru)10%DMSO后進行(xing)(xing)凍(dong)(dong)存(cun)(cun)(cun)。

【復蘇的原則】

快速(su)融(rong)化:必須將凍(dong)存在-196℃液氮中(zhong)的(de)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)快速(su)融(rong)化至37℃,使細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)外(wai)凍(dong)存時(shi)的(de)冰晶迅速(su)融(rong)化,避免冰晶緩慢融(rong)化時(shi)進入細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)形成再結晶,對(dui)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)造(zao)成損害(hai)。復旦細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)庫全(quan)國(guo)各地均可發貨,全(quan)國(guo)統一價格(ge),本公司出售(shou)的(de)所有(you)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)僅供科研使用。


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