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a-Glu Elisa Kit 
a-Glu Elisa Kit
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英文名稱 : Mouse α-Glucosidase, a-Glu Elisa Kit
貨號 : EY-00M1254
規格 : 96T/48T
品牌 : 上海一研
價格 :
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a-Glu Elisa Kit用途(tu):
本試劑盒僅供科研使用,定(ding)量(liang)檢測(ce)細胞液、體(ti)液、組織、血清、血漿等(deng)標(biao)本中(zhong)a-Glu的含量。

原理:

采(cai)用雙抗體(ti)夾心法測定a-Glu水平。用純化的a-Glu抗體包被微孔板,制成固相載

體,實驗(yan)時依次在微(wei)孔板中加(jia)入樣本及標準品,并加(jia)入 HRP 標記的 ABP 抗體,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,反復洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉化為藍色,再用硫酸終止反應,轉變成黃色。顏色的深淺和樣品中的 ABP含量呈正相關。采用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度(OD 值),根據標準曲線,計算測試樣品中 ABP 濃度。

a-Glu Elisa Kit試劑盒組成(cheng):

1

30 倍濃縮(suo)洗滌液

20ml×1 瓶

7

終止(zhi)液

6ml×1 瓶

2

酶(mei)標(biao)試(shi)劑

6ml×1瓶(ping)

8

陽性對照

0.5ml×1 瓶

3

酶標包被(bei)板

12 孔(kong)×8 條

9

陰性對(dui)照

0.5ml×1 瓶

4

樣品稀釋液

6ml×1 瓶

10

說明書

1 份

5

顯色劑 A 液

6ml×1 瓶

11

封(feng)板膜

2 張

6

顯(xian)色劑 B 液

6ml×1/瓶

12

密(mi)封袋

1 個

a-Glu Elisa Kit實驗材料與試劑配制:

1. 儀(yi)器與材料:酶標儀(yi)(使用前預熱30分鐘(zhong)),微量(liang)加液器、吸頭、蒸餾水(shui)或去離子(zi)水(shui),濾紙(zhi)。

2. 緩沖液(ye)(ye)使用:加5ul 的(de)緩沖液(ye)(ye)于(yu)50ul 的(de)樣(yang)品(pin)(pin)中,如果樣(yang)品(pin)(pin)量(liang)不夠或(huo)者不確定,緩沖液(ye)(ye)和樣(yang)品(pin)(pin)的(de)混合(he)比例不要小于(yu)1:10即可。

混勻,靜置(zhi)1小時備用(如果標本是血清或者血漿,此步驟忽略)。

3. 洗液的(de)配(pei)制:按1:100的(de)比例(li)配(pei)制洗液備用。

樣品收集、處理及保存(cun):

1. 細(xi)胞培養(yang)上(shang)清:適用于檢測體外(wai)培養(yang)的細(xi)胞分(fen)泌性成份。用無菌管收集細(xi)胞上(shang)清液,以1000×g離心(xin)15分(fen)鐘,收集上(shang)清。

2. 細胞(bao):用(yong)PBS反復洗(xi)滌細胞(bao)3次,調整細胞(bao)濃度達到104

-106

/ml 左右,通(tong)過反復凍融(rong),使(shi)細胞破壞(huai)并(bing)放出細胞內成份,或

者細(xi)胞超聲粉碎,離心取上清(qing)液(ye)檢(jian)測。

3. 血(xue)清:在(zai)室溫下,血(xue)液自(zi)然凝(ning)固,以1000×g離(li)心15分(fen)鐘(zhong),取上清待測。

4. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉(na)作(zuo)為抗凝劑,混(hun)合后(hou)靜(jing)置10-20 分鐘后(hou),以(yi)1000×g離心15分鐘,收集上

清(qing)。

5. 體液:包括胸(xiong)腹(fu)水、腦脊液,分泌物(wu)等。使(shi)用不含(han)熱原和內(nei)毒素的離(li)心管(guan)收集(ji)(ji),以1000×g離(li)心15分鐘,收集(ji)(ji)上(shang)清。

6. 組織(zhi)標(biao)(biao)本:切取組織(zhi)標(biao)(biao)本,稱取重(zhong)量0.5mg,加入500ul 的PBS,用手工或(huo)勻(yun)漿器,或(huo)超聲破碎儀將(jiang)標(biao)(biao)本勻(yun)漿,以(yi)2000-3000

rmp離心20 分鐘,收集上清進行檢測。

7. 樣品中(zhong)不能(neng)含有NaN3,因NaN3 抑制辣根過(guo)氧(yang)化(hua)物酶的(HRP)活性(xing)。

8. 保存:如果樣品(pin)不能立即檢測,應(ying)將其分裝,-70 ℃保存,避(bi)免反復冷凍。保存過程中如出現沉淀,應(ying)再次(ci)離(li)心。血液(ye)標

本盡可能的不(bu)要(yao)使用溶血或高血脂血。如(ru)果血清中含大量顆(ke)粒,檢測前先(xian)離心或過(guo)濾(lv)。不(bu)要(yao)在37℃或更高的溫度加熱解

凍(dong)。應在室溫下解(jie)凍(dong)并確保樣品均勻地充分解(jie)凍(dong)。

a-Glu Elisa Kit操(cao)作步驟:

1. 取出試劑盒,室(shi)溫(20-25℃)放置(zhi) 30 分(fen)鐘(zhong)。

2. 分組:取出(chu) 96 孔板(ban),根據待測樣品數(shu)量加上標準品的(de)數(shu)量決定所需(xu)的(de)板(ban)條數(shu),把剩(sheng)余的(de)板(ban)條繼續(xu)冷藏處理。分別設標準

品組(zu)(6 個濃度)、空白孔、待測樣品組。

注:為減少實驗誤差,保證準確性,建(jian)議設置復孔(kong)。

3. 加(jia)樣:依照(zhao)標準品的順序分別加(jia)入 50ul 的標準品溶液于(yu)空白微孔(kong)(kong)中;空白對(dui)照(zhao)孔(kong)(kong)加(jia)入 50ul 的蒸(zheng)餾水;其(qi)余微孔(kong)(kong)中加(jia)入 50ul

的(de)待(dai)測樣(yang)本。

4. 加酶標溶液(ye)(ye):標準品組、待(dai)測樣(yang)本組各孔中加入 100ul 的酶標溶液(ye)(ye)(空白對照孔除外(wai))。

5. 溫育:酶標(biao)板用封板紙密封后,放入濕盒內于 37℃恒溫孵育 1 小時。

6. 洗(xi)板(ban):用(yong)稀釋后的洗(xi)滌(di)液注(zhu)滿每(mei)孔,靜置 15-30s,充分清(qing)洗(xi)酶標板(ban) 5 次,用(yong)吸水紙徹底拍干。

7. 顯(xian)色:各孔加(jia)入顯(xian)色劑(ji) A 液(ye) 50ul 后,再加(jia)入顯(xian)色劑(ji) B 液(ye) 50ul。

8. 終止:25-37℃下(xia)避光反應 10-15 分鐘,加(jia)入 50ul 終止液。

9. 讀(du)板(ban):在 450nm 波(bo)長讀(du)取各孔的 OD 值(zhi)。

a-Glu Elisa Kit注意事項(xiang):

1. 實驗操作中必須使(shi)用一次性(xing)吸頭,避免交叉污(wu)染(ran)。

2. 加(jia)樣:加(jia)樣時(shi),要(yao)控(kong)制加(jia)樣速(su)度(du),避免**孔(kong)與最(zui)后一孔(kong)間的(de)時(shi)間間隔過大,否(fou)則將(jiang)會導致不同的(de)預孵育時(shi)間,從而影響

實驗的準(zhun)確性(xing)以及重(zhong)復(fu)性(xing)。

3. 孵(fu)育:嚴格按照(zhao)說明書上(shang)規定的(de)孵(fu)育時間(jian)和溫度進行(xing)。

4. 反應時(shi)(shi)間的控制:加(jia)入(ru)底物后請定時(shi)(shi)觀察反應孔的顏色變(bian)化(hua),如(ru)果(guo)顏色較深,請提前(qian)加(jia)入(ru)終(zhong)止(zhi)液終(zhong)止(zhi)反應。

5. 建(jian)議(yi)實(shi)驗(yan)前預(yu)測樣品含量,如樣品濃度過高,應對樣品進行(xing)稀釋(shi),計算(suan)結果時(shi)乘(cheng)以(yi)相應的(de)稀釋(shi)倍數。

6. 建議使用(yong)(yong)本試(shi)劑(ji)盒(he)時先做預(yu)實(shi)驗(即先做標準曲線,試(shi)用(yong)(yong)幾個標本),如果對本試(shi)劑(ji)盒(he)有(you)任何(he)疑(yi)問(wen),可和所購經銷商聯系(xi),

如果因運輸(shu)過程導致試劑盒失(shi)效,可(ke)要求調換,但概不承(cheng)擔產品本身以(yi)外(wai)的任何損失(shi)。

a-Glu Elisa Kit性(xing)能(neng)

1. 靈敏度(du)(du):最小的(de)檢測濃度(du)(du)小于1號標準品。稀釋度(du)(du)的(de)線(xian)性(xing)。樣品線(xian)性(xing)回歸與預(yu)期濃度(du)(du)相關系(xi)數R值(zhi)為(wei)0.990。

2. 特(te)異性:不與其它細胞因子(zi)反應。

3. 重復性:板內、板間變異(yi)系數均小于(yu)10%。

結果判(pan)斷與分(fen)析

1、儀器值:于波長450nm的(de)酶(mei)標儀上讀取(qu)各孔(kong)的(de)OD值

2、以吸光度(du)OD值為縱坐標(Y),相應(ying)的(de)(de)待測物質標準(zhun)品(pin)濃度(du)為橫(heng)坐標(X),做(zuo)得相應(ying)的(de)(de)曲線(xian),樣品(pin)的(de)(de)待測物質含量(liang)可根(gen)據其OD值由標準(zhun)曲線(xian)換算(suan)出相應(ying)的(de)(de)濃度(du)。


買家數量成交時間
正品保障(zhang)

確(que)保所(suo)有產(chan)品都是原裝正品

優(you)質(zhi)服務

優質服務,售后無憂

安全(quan)包裝

統一包(bao)裝,保障產品安全運(yun)輸

正(zheng)規發票(piao)

機打發票,附箱送達

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