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IL-7 Elisa Kit 
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英文名稱 : Rat Interleukin-7, IL-7 Elisa Kit
貨號 : EY-00R1891
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用途:本試劑盒(he)僅供科研使用,定(ding)量檢測細胞(bao)液、體液、組(zu)織、血(xue)(xue)清、血(xue)(xue)漿等標(biao)本中大鼠溶(rong)血(xue)(xue)磷脂酰膽堿(LPC)的(de)含量。

原理:

采(cai)用雙抗(kang)體夾心法測定MTHFD2水平(ping)。用純化的MTHFD2抗(kang)體包被(bei)微(wei)孔板,制成固(gu)相載

體(ti)(ti),實(shi)驗時依次在微孔板中加入(ru)樣本及標準品,并加入(ru) HRP 標記的(de)(de) ABP 抗體(ti)(ti),形成抗體(ti)(ti)-抗原-酶標抗體(ti)(ti)復(fu)合物,反復(fu)洗滌后加底(di)物 TMB 顯色(se)。TMB 在過氧化物酶的(de)(de)催化下轉(zhuan)化為藍色(se),再用(yong)硫酸(suan)終止反應(ying),轉(zhuan)變成黃色(se)。顏色(se)的(de)(de)深淺(qian)和樣品中的(de)(de) ABP含量呈正相關。采用(yong)酶標儀(yi)在 450nm 波長測定(ding)吸光度(OD 值(zhi)),根(gen)據標準曲線(xian),計算(suan)測試樣品中 ABP 濃度。

試劑盒組成:

1

30 倍濃縮洗滌液

20ml×1 瓶

7

終止液

6ml×1 瓶

2

酶標試劑

6ml×1瓶(ping)

8

陽性對照

0.5ml×1 瓶

3

酶標包被板

12 孔(kong)×8 條(tiao)

9

陰性對照

0.5ml×1 瓶

4

樣品稀釋液

6ml×1 瓶

10

說明書

1 份

5

顯色劑 A 液

6ml×1 瓶

11

封板膜

2 張

6

顯色劑 B 液

6ml×1/瓶

12

密封袋

1 個

實驗材料與試劑配(pei)制:

1. 儀器與(yu)材(cai)料(liao):酶(mei)標儀(使用(yong)前預熱(re)30分(fen)鐘),微量加液器、吸頭、蒸餾水或去離子水,濾紙(zhi)。

2. 緩(huan)沖(chong)液(ye)使(shi)用:加5ul 的(de)(de)緩(huan)沖(chong)液(ye)于(yu)50ul 的(de)(de)樣品(pin)中,如果樣品(pin)量不夠或者不確定,緩(huan)沖(chong)液(ye)和樣品(pin)的(de)(de)混合(he)比例不要小于(yu)1:10即(ji)可。

混勻(yun),靜置1小時備用(如果標本(ben)是血清或者血漿,此(ci)步(bu)驟忽略)。

3. 洗(xi)液的配制:按1:100的比例配制洗(xi)液備用。

樣品收集(ji)、處理及保存(cun):

1. 細胞培養上(shang)清(qing):適用于(yu)檢測體外培養的細胞分泌性成份。用無菌管收(shou)集細胞上(shang)清(qing)液,以1000×g離心15分鐘(zhong),收(shou)集上(shang)清(qing)。

2. 細(xi)(xi)胞:用PBS反復洗滌細(xi)(xi)胞3次(ci),調整細(xi)(xi)胞濃度達(da)到104

-106/ml 左右,通(tong)過反(fan)復凍融,使細胞破壞并放出細胞內(nei)成(cheng)份,或

者細胞超聲粉碎(sui),離心取(qu)上清液檢測。

3. 血清:在室溫下,血液自然凝固(gu),以1000×g離心15分鐘,取上清待測。

4. 血漿:應根(gen)據標本的要(yao)求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作(zuo)為抗凝劑(ji),混合后靜(jing)置10-20 分鐘(zhong)后,以1000×g離心(xin)15分鐘(zhong),收集上清。

5. 體液:包括(kuo)胸腹水、腦脊液,分泌物等。使用不含熱原和內毒素的離心(xin)管收集(ji),以1000×g離心(xin)15分鐘(zhong),收集(ji)上(shang)清(qing)。

6. 組織(zhi)(zhi)標(biao)(biao)本:切取組織(zhi)(zhi)標(biao)(biao)本,稱取重量(liang)0.5mg,加入500ul 的PBS,用手(shou)工或勻漿(jiang)器,或超聲破碎儀將標(biao)(biao)本勻漿(jiang),以(yi)2000-3000

rmp離(li)心20 分鐘,收集上清(qing)進(jin)行檢測。

7. 樣品中不能含有NaN3,因NaN3 抑(yi)制辣根(gen)過氧化物酶的(HRP)活(huo)性。

8. 保(bao)存:如果樣品不能立即檢(jian)測,應將其分裝,-70 ℃保(bao)存,避(bi)免反復冷凍。保(bao)存過程中(zhong)如出現沉淀(dian),應再次離(li)心(xin)。血液標

本盡(jin)可能的(de)(de)不要(yao)使用溶血或高(gao)血脂(zhi)血。如果血清中含大量(liang)顆粒,檢測前先離(li)心或過濾。不要(yao)在37℃或更高(gao)的(de)(de)溫度(du)加熱解(jie)

凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充(chong)分解凍。

操作步驟:

1. 取出試(shi)劑盒,室溫(20-25℃)放(fang)置 30 分鐘(zhong)。

2. 分(fen)組:取出 96 孔板(ban),根(gen)據(ju)待測樣(yang)品數量加(jia)上標(biao)(biao)準品的(de)(de)數量決定所(suo)需的(de)(de)板(ban)條(tiao)數,把剩余的(de)(de)板(ban)條(tiao)繼續冷(leng)藏處(chu)理。分(fen)別(bie)設標(biao)(biao)準

品組(6 個(ge)濃(nong)度(du))、空白孔、待(dai)測樣品組。

注:為減少實驗誤(wu)差,保證準確性,建議設置復(fu)孔。

3. 加(jia)樣:依(yi)照標(biao)準品(pin)的(de)順序分別加(jia)入(ru) 50ul 的(de)標(biao)準品(pin)溶液于空白微孔中;空白對照孔加(jia)入(ru) 50ul 的(de)蒸餾水;其余(yu)微孔中加(jia)入(ru) 50ul

的待測樣本。

4. 加(jia)酶(mei)標(biao)溶液:標(biao)準(zhun)品組、待測樣本組各孔中(zhong)加(jia)入(ru) 100ul 的酶(mei)標(biao)溶液(空白對照孔除外)。

5. 溫育:酶標板用封板紙密封后,放入濕盒(he)內于 37℃恒溫孵育 1 小時。

6. 洗(xi)板:用稀釋(shi)后的(de)洗(xi)滌液注滿每孔,靜(jing)置(zhi) 15-30s,充分清洗(xi)酶(mei)標板 5 次,用吸水紙(zhi)徹底拍(pai)干。

7. 顯(xian)色(se):各孔(kong)加入顯(xian)色(se)劑(ji) A 液 50ul 后,再加入顯(xian)色(se)劑(ji) B 液 50ul。

8. 終止(zhi):25-37℃下避光反應 10-15 分鐘,加(jia)入(ru) 50ul 終止(zhi)液(ye)。

9. 讀(du)板:在 450nm 波長讀(du)取(qu)各孔的 OD 值。

注意事項:

1. 實驗操作中必(bi)須使用(yong)一次性(xing)吸頭,避免交叉污染(ran)。

2. 加(jia)樣(yang)(yang):加(jia)樣(yang)(yang)時(shi),要控制(zhi)加(jia)樣(yang)(yang)速度(du),避免**孔與最后一孔間的時(shi)間間隔(ge)過大,否則將會導致不同的預孵育時(shi)間,從(cong)而影響(xiang)

實驗(yan)的準確(que)性以及重復性。

3. 孵育(yu):嚴(yan)格按(an)照說明書上規定的孵育(yu)時間和溫(wen)度進行。

4. 反(fan)應(ying)(ying)時間的(de)控制:加入(ru)底物后請(qing)定(ding)時觀察反(fan)應(ying)(ying)孔(kong)的(de)顏色(se)變化,如果顏色(se)較深,請(qing)提前加入(ru)終(zhong)止液終(zhong)止反(fan)應(ying)(ying)。

5. 建議實驗(yan)前預測樣(yang)(yang)品含量,如樣(yang)(yang)品濃度過(guo)高,應對樣(yang)(yang)品進行稀釋,計算結果時乘以相應的稀釋倍(bei)數(shu)。

6. 建議使用(yong)本試(shi)劑(ji)盒(he)時先(xian)做(zuo)預實驗(即先(xian)做(zuo)標(biao)準曲線(xian),試(shi)用(yong)幾(ji)個標(biao)本),如果對本試(shi)劑(ji)盒(he)有任何疑問,可和所購(gou)經銷(xiao)商(shang)聯系,

如果因運輸過(guo)程(cheng)導致試劑盒(he)失(shi)(shi)效,可要求調換,但概不承(cheng)擔產(chan)品本身以外的任(ren)何損失(shi)(shi)。

性能

1. 靈敏(min)度:最(zui)小(xiao)的(de)檢測濃(nong)度小(xiao)于1號標準品。稀釋度的(de)線(xian)性。樣品線(xian)性回(hui)歸與預(yu)期濃(nong)度相關系數R值為0.990。

2. 特異性:不與其它細胞(bao)因(yin)子反應。

3. 重復性:板內(nei)、板間變異系數均小于10%。

結果判斷與分析

1、儀(yi)器值(zhi):于波長(chang)450nm的(de)酶標(biao)儀(yi)上讀取各孔(kong)的(de)OD值(zhi)

2、以吸光度(du)(du)OD值為縱坐標(biao)(Y),相應的(de)待測(ce)物(wu)質標(biao)準品濃(nong)度(du)(du)為橫坐標(biao)(X),做得相應的(de)曲線(xian),樣品的(de)待測(ce)物(wu)質含量可根據(ju)其OD值由標(biao)準曲線(xian)換算(suan)出相應的(de)濃(nong)度(du)(du)。


買家數量成交時間
正品(pin)保障

確保(bao)所(suo)有(you)產品(pin)都是原裝正品(pin)

優(you)質(zhi)服務

優質服務,售后無憂

安全(quan)包裝

統一(yi)包裝,保障(zhang)產品安全(quan)運輸

正規(gui)發票

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