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IL-1α Elisa Kit 
IL-1α Elisa Kit
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英文名稱 : Rat Interleukin 1α , IL-1α Elisa Kit
貨號 : EY-00R2532
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用(yong)途:本(ben)試劑盒僅供科研(yan)使(shi)用(yong),定量檢測細胞液(ye)、體(ti)液(ye)、組織、血(xue)清、血(xue)漿等標本(ben)中大(da)鼠(shu)溶血(xue)磷脂酰膽堿(LPC)的含量。


原理:


采(cai)用(yong)雙抗(kang)體(ti)夾心法(fa)測(ce)定(ding)MTHFD2水平(ping)。用(yong)純化(hua)的MTHFD2抗(kang)體(ti)包被微孔板,制成(cheng)固相載


體(ti)(ti),實驗時依次在微孔板中加(jia)(jia)入(ru)樣(yang)本及標(biao)(biao)(biao)準品,并加(jia)(jia)入(ru) HRP 標(biao)(biao)(biao)記的(de)(de) ABP 抗體(ti)(ti),形成抗體(ti)(ti)-抗原-酶(mei)標(biao)(biao)(biao)抗體(ti)(ti)復合物,反復洗(xi)滌后(hou)加(jia)(jia)底物 TMB 顯色。TMB 在過氧化物酶(mei)的(de)(de)催化下轉化為藍色,再用硫酸(suan)終止反應,轉變成黃色。顏色的(de)(de)深淺和樣(yang)品中的(de)(de) ABP含量呈正相(xiang)關。采用酶(mei)標(biao)(biao)(biao)儀(yi)在 450nm 波長(chang)測(ce)(ce)定吸光度(OD 值),根據標(biao)(biao)(biao)準曲線,計算(suan)測(ce)(ce)試樣(yang)品中 ABP 濃度。


試劑盒組成:


1


30 倍濃縮洗滌液


20ml×1 瓶


7


終止液


6ml×1 瓶


2


酶標試劑


6ml×1瓶


8


陽性對照


0.5ml×1 瓶


3


酶標包被板


12 孔×8 條


9


陰性對照


0.5ml×1 瓶


4


樣品稀釋液


6ml×1 瓶


10


說明書


1 份


5


顯色劑 A 液


6ml×1 瓶


11


封板膜


2 張


6


顯色劑 B 液


6ml×1/瓶(ping)


12


密封袋


1 個


實驗材料(liao)與(yu)試劑配制:


1. 儀器與(yu)材料:酶(mei)標(biao)儀(使用前預熱30分鐘),微量加液器、吸頭、蒸餾水(shui)或去(qu)離子水(shui),濾紙。


2. 緩沖液使用:加5ul 的(de)緩沖液于(yu)50ul 的(de)樣品中,如果樣品量不(bu)夠或者不(bu)確定,緩沖液和(he)樣品的(de)混(hun)合比例(li)不(bu)要小于(yu)1:10即可。


混勻,靜置1小時備用(如果(guo)標本是血(xue)清或(huo)者血(xue)漿,此步驟忽略)。


3. 洗液的配制:按1:100的比例配制洗液備用。


樣品收集、處理(li)及(ji)保存:


1. 細(xi)(xi)胞培(pei)養(yang)上清:適用(yong)于檢(jian)測體外培(pei)養(yang)的細(xi)(xi)胞分(fen)泌性(xing)成(cheng)份。用(yong)無菌管收(shou)集細(xi)(xi)胞上清液(ye),以(yi)1000×g離心15分(fen)鐘,收(shou)集上清。


2. 細(xi)(xi)胞(bao):用PBS反復洗滌細(xi)(xi)胞(bao)3次(ci),調整細(xi)(xi)胞(bao)濃度達到(dao)104


-106/ml 左右,通過反復凍融,使細胞破壞并放出(chu)細胞內成份,或


者細胞超(chao)聲粉碎,離心取上(shang)清(qing)液檢測。


3. 血(xue)清:在(zai)室溫下,血(xue)液自然凝固,以1000×g離心15分鐘,取上清待測。


4. 血漿:應根據標(biao)本的要求選擇EDTA 或檸檬酸(suan)鈉(na)作(zuo)為(wei)抗(kang)凝劑,混合(he)后靜(jing)置10-20 分鐘后,以1000×g離心15分鐘,收集上清(qing)。


5. 體液:包括胸腹水、腦(nao)脊液,分泌物等。使用(yong)不含熱原和內毒素的離(li)心管收集(ji),以(yi)1000×g離(li)心15分鐘,收集(ji)上清。


6. 組(zu)(zu)織標本(ben):切取(qu)組(zu)(zu)織標本(ben),稱取(qu)重量0.5mg,加入500ul 的PBS,用手工或勻漿(jiang)器(qi),或超聲(sheng)破碎儀將標本(ben)勻漿(jiang),以2000-3000


rmp離心20 分鐘,收集上清進行檢測。


7. 樣品(pin)中不(bu)能含有NaN3,因NaN3 抑制辣根過氧化(hua)物酶(mei)的(HRP)活(huo)性。


8. 保(bao)(bao)存:如果樣(yang)品(pin)不能(neng)立(li)即檢測,應將(jiang)其分裝(zhuang),-70 ℃保(bao)(bao)存,避免(mian)反復冷凍(dong)。保(bao)(bao)存過程(cheng)中如出(chu)現沉(chen)淀,應再(zai)次(ci)離心(xin)。血液標


本盡可能(neng)的(de)不(bu)要使用溶血或高血脂血。如(ru)果血清中含大量顆粒(li),檢(jian)測前先離心(xin)或過濾(lv)。不(bu)要在37℃或更高的(de)溫度加(jia)熱解


凍(dong)。應在室溫下解凍(dong)并確保樣(yang)品(pin)均勻(yun)地充(chong)分解凍(dong)。


操作步驟:


1. 取出試(shi)劑盒,室(shi)溫(20-25℃)放置(zhi) 30 分鐘。


2. 分組:取出 96 孔板(ban),根據待測樣品數(shu)量加上標準品的(de)(de)數(shu)量決定所(suo)需的(de)(de)板(ban)條(tiao)數(shu),把(ba)剩余的(de)(de)板(ban)條(tiao)繼續冷藏處理(li)。分別設標準


品組(zu)(6 個濃度)、空白孔、待(dai)測樣品組(zu)。


注:為減少實驗(yan)誤(wu)差(cha),保(bao)證準確(que)性,建議設置(zhi)復(fu)孔。


3. 加樣:依照(zhao)(zhao)標準品的(de)(de)順序分別加入(ru) 50ul 的(de)(de)標準品溶(rong)液于空白(bai)微孔(kong)中(zhong)(zhong);空白(bai)對照(zhao)(zhao)孔(kong)加入(ru) 50ul 的(de)(de)蒸(zheng)餾(liu)水;其余(yu)微孔(kong)中(zhong)(zhong)加入(ru) 50ul


的待測樣本。


4. 加酶標溶液:標準品組、待測(ce)樣(yang)本組各孔中加入 100ul 的酶標溶液(空白對照孔除(chu)外)。


5. 溫育(yu):酶標(biao)板(ban)用封板(ban)紙密封后,放入濕盒內于(yu) 37℃恒溫孵育(yu) 1 小時。


6. 洗(xi)板:用稀釋(shi)后的洗(xi)滌(di)液(ye)注滿(man)每孔,靜置 15-30s,充分(fen)清洗(xi)酶標板 5 次,用吸水紙徹底拍干(gan)。


7. 顯(xian)色(se):各孔加入顯(xian)色(se)劑(ji) A 液(ye) 50ul 后,再加入顯(xian)色(se)劑(ji) B 液(ye) 50ul。


8. 終(zhong)止:25-37℃下避光反應 10-15 分鐘(zhong),加入 50ul 終(zhong)止液(ye)。


9. 讀(du)板:在 450nm 波長讀(du)取各孔的 OD 值。


注意事項:


1. 實驗操作中必須(xu)使用(yong)一次性吸頭,避免交(jiao)叉污染。


2. 加(jia)樣(yang):加(jia)樣(yang)時,要(yao)控制加(jia)樣(yang)速度(du),避免**孔與最后一(yi)孔間(jian)的(de)時間(jian)間(jian)隔過大,否則將會(hui)導致不同的(de)預(yu)孵育時間(jian),從而影響


實(shi)驗的準確性以及(ji)重復性。


3. 孵育(yu):嚴格按照(zhao)說明書上規定的(de)孵育(yu)時間和溫度進行。


4. 反(fan)(fan)應(ying)時間(jian)的控制:加(jia)入底物后(hou)請定時觀察(cha)反(fan)(fan)應(ying)孔的顏色變化(hua),如果顏色較深,請提(ti)前加(jia)入終止液終止反(fan)(fan)應(ying)。


5. 建議實驗前預測樣品(pin)(pin)含量,如樣品(pin)(pin)濃度過(guo)高,應(ying)對(dui)樣品(pin)(pin)進行稀釋,計(ji)算結果時乘以相應(ying)的稀釋倍(bei)數。


6. 建議使用本(ben)試劑盒(he)時先做預(yu)實(shi)驗(即(ji)先做標(biao)準曲線,試用幾個標(biao)本(ben)),如果對(dui)本(ben)試劑盒(he)有(you)任何疑(yi)問,可和所(suo)購經銷商聯系,


如果(guo)因運輸過程(cheng)導(dao)致試劑盒失(shi)(shi)效,可要求調換(huan),但(dan)概(gai)不(bu)承擔產品本身以外的任何損失(shi)(shi)。


性能


1. 靈敏度(du):最小(xiao)(xiao)的(de)檢測濃度(du)小(xiao)(xiao)于1號標準品(pin)。稀釋度(du)的(de)線(xian)(xian)性。樣(yang)品(pin)線(xian)(xian)性回歸與(yu)預期濃度(du)相(xiang)關系數R值為0.990。


2. 特(te)異性(xing):不(bu)與其(qi)它(ta)細胞(bao)因子反應。


3. 重復性:板(ban)內、板(ban)間變異(yi)系數均(jun)小于(yu)10%。


結果判斷與分析


1、儀(yi)器值(zhi)(zhi):于波(bo)長450nm的(de)酶標儀(yi)上讀(du)取各孔(kong)的(de)OD值(zhi)(zhi)


2、以吸光度(du)OD值為(wei)縱坐標(biao)(biao)(Y),相(xiang)應(ying)(ying)的(de)待測(ce)物(wu)質標(biao)(biao)準品(pin)濃(nong)度(du)為(wei)橫坐標(biao)(biao)(X),做得相(xiang)應(ying)(ying)的(de)曲線,樣品(pin)的(de)待測(ce)物(wu)質含量可根(gen)據其OD值由標(biao)(biao)準曲線換算出相(xiang)應(ying)(ying)的(de)濃(nong)度(du)。


買家數量成交時間
正(zheng)品(pin)保障

確保所有產品都是原(yuan)裝正品

優質服(fu)務

優質服務,售后無憂

安全包裝(zhuang)

統一包裝,保障(zhang)產(chan)品安全(quan)運輸

正規(gui)發票

機打發票,附箱送達

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