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牛棒桿菌探針法熒光定量PCR 試(shi)劑盒 
牛棒桿菌探針法熒光定量PCR 試劑盒
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品牌 : 一研
貨號 : GY-L510
規格 : 50T
價格 :
3800.00
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牛棒桿菌探針法熒(ying)光定(ding)量PCR 試劑盒


【產品(pin)名稱(cheng)】牛棒桿菌探針法熒光定量PCR 試劑盒

Name   Corynebacterium Bovis Probe qPCR Kit

【包裝規格】50次/盒                                                                    

【預(yu)期用途(tu)】牛(niu)棒狀桿菌病(bing)(Bovine Corynebacteriosis)是(shi)(shi)指由棒(bang)狀桿菌(jun)屬(Corynebacterium spp.)的(de)某些細菌(jun)引起的(de)膀胱(guang)炎和腎(shen)盂腎(shen)炎。臨床主要特征為頻尿、濁尿、血尿和發熱。該病(bing)(bing)主要見于成(cheng)年母牛,多在(zai)妊娠期和產后發病(bing)(bing)。本(ben)(ben)病(bing)(bing)分布于世(shi)界各地(di)。因(yin)此快速靈(ling)敏(min)檢測牛棒(bang)桿菌(jun)具(ju)有重要意(yi)義。本(ben)(ben)產品就是(shi)(shi)為此目的(de)根據 PCR 原理開(kai)發的(de)試劑盒,它(ta)具(ju)有下(xia)列(lie)特點:

1. 即(ji)開即(ji)用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板。

2. 引物和(he)探針經過優化,靈敏(min)性(xing)高(gao)。

3. 提供陽性(xing)對照,便(bian)于(yu)區分假陰(yin)性(xing)樣(yang)品(pin)。

4. 特異性高,引物(wu)是根據牛(niu)棒桿菌高度保守區設計,不會跟(gen)其(qi)他(ta)細菌的 DNA 發生交叉反應。

5. 本產品足夠 50 次 20μL 體(ti)系的探針法熒光(guang)定量 PCR 反應。

6. 本(ben)產品只能用于科(ke)研。

規格及成分

成分

包裝

2×Probe qPCR MagicMix

500 μL(本色蓋)

熒光PCR 專用模(mo)板(ban)稀釋液

1 mL(黃蓋)

牛(niu)棒桿(gan)菌探針法qPCR 引(yin)物混 合液(ye)

100 μL(白蓋)

牛棒桿菌qPCR 探針

50 μL(棕色(se)管)

牛(niu)棒(bang)桿菌探(tan)針法qPCR 陽性對(dui)照(zhao) (1×10E8 拷貝/μL)

50 μL(黃蓋)

使用手冊

1

運輸(shu)及保存低(di)溫運輸,-20℃保存,保存期限為 12 個月

自備(bei)試(shi)劑樣品DNA。

【使用方(fang)法】一(yi)、稀釋(shi)標準(zhun)曲線樣品(pin)(以10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(ge) 10 倍稀釋度(du)為例(li))。 由于標準品(pin)濃(nong)度(du)非(fei)常高,因此(ci)下列稀釋操(cao)作(zuo)一定要(yao)在(zai)獨立的區域(yu)進行,千萬不(bu)能 污染樣品(pin)或(huo)本(ben)試劑(ji)盒的其他成(cheng)分)。為增加產品(pin)穩定性(xing)和避免(mian)擴散傳染性(xing)病原,本(ben)產品(pin)不(bu)提供(gong)活體樣品(pin)做陽性(xing)對照,只提供(gong)無(wu)傳染性(xing)的 DNA 片段作(zuo)為陽性(xing)對照。

1. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。

2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒(ying)光(guang) PCR 專用模板稀釋(shi)液,**用帶芯槍頭,下同)。

3. 在 7 號管(guan)中(zhong)(zhong)加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的(de)陽性對照(試劑盒提(ti)供),充分震 蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的(de)標(biao)準曲線樣品。放冰上待用。

4. 換槍頭,在(zai) 6 號管中(zhong)加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步(bu)稀釋(shi)所(suo)得(de)),充(chong)分震蕩 1 分鐘,得(de) 1×10E6 拷貝/μL 的標準(zhun)曲線樣品。放冰上待用。

5. 換槍頭,在 5 號管(guan)中加入 5 μL 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的(de)陽性對照(上步(bu)稀釋(shi)所得(de)),充分震蕩 1 分鐘,得(de) 1×10E5 拷(kao)貝/μL 的(de)標準(zhun)曲線樣(yang)品(pin)。放(fang)冰上待用。

6. 重復上面的操作直到(dao)得到(dao) 6 個(ge)稀釋(shi)度的標準曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品DNA 的制(zhi)備

7. 如(ru)果有 N 個(ge)樣(yang)品(pin),**設置 N+2 個(ge)提取,多出的一(yi)個(ge)是 PC(樣(yang)品(pin)制備陽性 對照(zhao)),一(yi)個(ge)是 NC(樣(yang)品(pin)制備陰性對照(zhao))。可(ke)以用(yong) 10μL 陽性對照(zhao)的 10000倍(bei)稀釋液再加上一(yi)定量的水(shui)使總體積跟每(mei)次制備要求(qiu)的體積一(yi)樣(yang),以此(ci)作(zuo)為(wei)PC。另外用(yong)水(shui)作(zuo)為(wei) NC。

8. 用自選方法純(chun)化樣(yang)品的 DNA,本(ben)(ben)試(shi)劑(ji)盒跟市場上大(da)多數 DNA 提(ti)取(qu)試(shi)劑(ji)盒兼容。也可(ke)以選購本(ben)(ben)公司(si)的柱式細菌DNAout。本(ben)(ben)試(shi)劑(ji)盒免費贈送 20次免DNA 提(ti)取(qu)的核(he)酸(suan)釋放劑(ji),本(ben)(ben)產品的裂解液可(ke)以直(zhi)接作(zuo)為 PCR 模板,省(sheng)略 了(le) DNA 提(ti)取(qu)步驟(zou)。

三、Probe qPCR 反應(20μL 體系,在樣品制備室進行)

9. 如果做(zuo)定量分析(xi)并(bing)且只做(zuo) 1 次重(zhong)復,則標記(ji) N+9 個(ge)(ge)(ge)(ge) PCR 管,其中(zhong)(zhong) N+2 個(ge)(ge)(ge)(ge)用(yong)(yong)于(yu)上步得到的(de) N+2 個(ge)(ge)(ge)(ge)樣品,1 個(ge)(ge)(ge)(ge)用(yong)(yong)于(yu) PCR 陰(yin)性(xing)(xing)對照(zhao)(用(yong)(yong)水做(zuo)模板(ban)),6 個(ge)(ge)(ge)(ge)用(yong)(yong)于(yu)標準曲(qu)線(xian)。如果做(zuo)定性(xing)(xing)分析(xi),并(bing)且只做(zuo) 1 次重(zhong)復,則標記(ji) N+4 個(ge)(ge)(ge)(ge) PCR 管,其中(zhong)(zhong) N+2 個(ge)(ge)(ge)(ge)用(yong)(yong)于(yu)上步得到的(de) N+2 個(ge)(ge)(ge)(ge)樣品,1 個(ge)(ge)(ge)(ge)用(yong)(yong)于(yu) PCR 陰(yin)性(xing)(xing)對照(zhao)(用(yong)(yong)水做(zuo)模板(ban)),1 個(ge)(ge)(ge)(ge)用(yong)(yong)于(yu) PCR 陽性(xing)(xing)對照(zhao)(用(yong)(yong)第 4 號(hao)管的(de)陽性(xing)(xing)對照(zhao)稀釋(shi)液做(zuo)模板(ban))。下面只以定量分析(xi)為例描述操作步驟。

10. 在標記(ji)管中(zhong)按下表加入(ru)各(ge)成分(本表只列出一(yi)次重(zhong)復(fu)。樣(yang)品管和陰(yin)性對(dui)照設 置完畢(bi)后(hou)(hou)(hou)才(cai)設置陽(yang)性對(dui)照,并且陽(yang)性對(dui)照樣(yang)品要(yao)等所有(you)管子(zi)蓋上蓋子(zi)儲(chu)存(cun)好后(hou)(hou)(hou)最后(hou)(hou)(hou)加):

成分/每管

樣品(pin)管

N+2 個

RT-PCR

陰性(xing)對照

標準曲(qu)線樣品管

1-6 管)

2×Probe qPCR MagicMix

10 μL

10 μL

10 μL

牛棒桿菌 qPCR 探針

1 μL

1 μL

1 μL

牛棒桿菌探針法 qPCR 引物混合液

2 μL

2 μL

2 μL

N+2 個待測 DNA 模板

7 μL

-

-

超純水

-

7 μL

-

7 步所得標準曲線樣品稀釋液(2-7 號)

-

-

7 μL(2 號樣到2 號管,3 號樣到 3 號管…)

11.蓋上(shang)蓋子后(hou)上(shang)機,按面參數(shu)進行 RT-PCR

過程

溫度

時間

預變性

95℃

5 min

PCR 反應(ying)

40 個循(xun)環(huan))

95℃

15sec

60℃

60sec(采集 FAM 通道的熒光(guang)信號)

四、數據處

12. 如果把(ba)本(ben)試劑(ji)盒(he)用于(yu)定量檢測(ce),則以陽性對照濃(nong)度的(de)(de) log 值為(wei)橫軸,以 Ct 值為(wei)縱軸,繪(hui)制標(biao)準曲線(xian)。再以待(dai)測(ce)樣品(pin)的(de)(de) Ct 值從標(biao)準曲線(xian)上推算出樣品(pin) RNA 濃(nong)度的(de)(de) log 值,再推算出其(qi)濃(nong)度。

13. 如(ru)果(guo)(guo)把(ba)本試(shi)劑盒用于(yu)定性(xing)(xing)(xing)(xing)檢測,只判斷(duan)陽(yang)性(xing)(xing)(xing)(xing)或(huo)陰(yin)(yin)性(xing)(xing)(xing)(xing),則(ze)陰(yin)(yin)性(xing)(xing)(xing)(xing)對(dui)(dui)照 Ct 必須大 于(yu)或(huo)等(deng)于(yu) 40。陽(yang)性(xing)(xing)(xing)(xing)對(dui)(dui)照必須有(you)熒(ying)光對(dui)(dui)數(shu)增(zeng)長,有(you)典型(xing)擴增(zeng)曲線(xian),Ct 值應該(gai) 小(xiao)于(yu)或(huo)等(deng)于(yu) 30。對(dui)(dui)待測樣品(pin),如(ru)果(guo)(guo)其 Ct 大于(yu)或(huo)等(deng)于(yu) 40 則(ze)為陰(yin)(yin)性(xing)(xing)(xing)(xing),如(ru)果(guo)(guo)小(xiao)于(yu)或(huo)等(deng)于(yu) 35 則(ze)為陽(yang)性(xing)(xing)(xing)(xing)。如(ru)果(guo)(guo)在 35-40 之間,則(ze)重復一次(ci)。重復實驗的 Ct 值如(ru)果(guo)(guo)大于(yu)或(huo)等(deng)于(yu) 40 則(ze)為陰(yin)(yin)性(xing)(xing)(xing)(xing),如(ru)果(guo)(guo)小(xiao)于(yu) 40,則(ze)為陽(yang)性(xing)(xing)(xing)(xing)。


買家數量成交時間
正品保(bao)障

確保所有(you)產品(pin)都是原裝(zhuang)正品(pin)

優質服務

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統一包裝,保(bao)障產品安全運輸(shu)

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